摘 要： 為了分析水燭香蒲花粉和莖葉中黃酮類成分，以及不同生長期、不同部位中香蒲新苷、異鼠李素-3-O-新橙皮苷和異鼠李素含量。該文采用UPLC-Q-TOF-MS進行定性分析，結合HPLC法對水燭香蒲不同部位中黃酮類化合物含量進行分析評價，色譜條件為PRAZIS C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm)，以乙腈-0.05%磷酸為流動相，梯度洗脫，體積流量1.0 mL·min-1，檢測波長254 nm，柱溫30 ℃。結果表明：(1)花粉及莖葉中共解析出42個化合物，其中8個化合物在不同部位中有差異。(2)同一生長環(huán)境的水燭香蒲不同生長時期、不同部位中3種黃酮類化合物的含量差異較大。(3)異鼠李素-3-O-新橙皮苷及異鼠李素在香蒲的發(fā)育生長過程中含量呈先增加后下降的趨勢，莖葉內(nèi)的這兩種成分含量下降明顯;在花粉中，香蒲新苷和異鼠李素-3-O-新橙皮苷含量急劇上升，一周內(nèi)達到峰值;莖葉中香蒲新苷含量較低，在大多數(shù)樣品中未檢出。該研究所建立的測定方法簡便、重現(xiàn)性好，并對水燭香蒲中黃酮類成分的含量變化規(guī)律進行了研究，對花粉及莖葉中化合物差異進行了分析，為蒲黃的合理采收及香蒲植物的資源化利用提供了科學依據(jù)。

　　關鍵詞： 水燭香蒲， 香蒲新苷， 異鼠李素-3-O-新橙皮苷， 異鼠李素， 動態(tài)分析

　　香蒲屬(Typha)植物為香蒲科(Typhaceae)多年生水生或沼生植物，廣泛分布于熱帶至溫帶地區(qū)(王茹等，2013)，全世界有24種，其中我國分布有12種?！吨袊幍洹?015版規(guī)定，蒲黃藥材為水燭香蒲(Typha angustifolia)、東方香蒲(T. orientalis)或同屬植物的干燥花粉(國家藥典委員會，2015)，具有止血、化瘀、通淋之功效(代玄燁，2017)。蒲黃中含有黃酮類、酚酸類、腦苷、腺苷、甾體類及多糖類等多種成分(陳毓等，2015;白雪薇等，2018;Zeng et al.， 2018)，其中黃酮類成分為其主要有效成分，具有改善胰島素抵抗、抑制炎癥、改善血液流變學狀態(tài)以及止血及抗氧化等作用(Chen et al.， 2017;Lei et al.， 2018)。

　　香蒲屬植物的莖葉與花粉的化學成分組成類似，均有促進傷口愈合的作用(Ondua et al.， 2019)。除藥用外，香蒲屬植物在食品、飲料、保健品、材料、肥料、工藝品中也有廣泛應用，而且在水體環(huán)境保護方面，香蒲屬植物具有獨特的應用價值(陳佩東等，2015)。前期開展的江蘇省中藥資源普查過程中發(fā)現(xiàn)，江蘇地區(qū)的香蒲屬植物野生資源量較大，主要以花粉利用為主，但是莖、葉等其他部位的資源化利用并不充分。蒲黃一般在每年6月份采收(嚴華等，2019)，由于分布廣泛，地理生態(tài)環(huán)境、采收方式等因素的影響，各地采收的花粉中化學成分的組成存在較大差異，同時，花粉中化學成分的動態(tài)變化規(guī)律也需要深入研究。因此，本課題組首先在江蘇省南京市進行了定點連續(xù)采樣，然后基于UPLC-Q-TOF-MS技術對水燭香蒲花粉、莖葉中的化學成分進行定性研究，同時基于HPLC技術對水燭香蒲不同生長時期花粉和莖葉中3種黃酮類化合物(香蒲新苷、異鼠李素-3-O-新橙皮苷和異鼠李素)的含量進行定量分析，以期探究香蒲屬植物的資源性化學成分在不同部位的分布情況以及積累的動態(tài)，為香蒲屬植物的資源化學成分的進一步動態(tài)評價及開發(fā)利用提供科學依據(jù)。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 儀器 AB SCIEX Triple TOFTM 5600質(zhì)譜儀，電噴霧離子源(ESI)(美國AB SCIEX公司)，TF 1.6 Analyst工作站以及Peak View分析軟件，配備LC-20A型液相色譜儀(日本島津公司)。Agilent 1290高效液相色譜儀;Micro CL21R高速冷凍離心機(Thermo Fisher Scientific);JY10002電子天平(上海上平儀器有限公司);掃描電鏡(日本Hitachi S-4800);420三用恒溫水箱(江蘇金壇國勝實驗儀器廠);KQ-500B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);DHG-9023A型電熱鼓風干燥箱(上海精宏實驗設備有限公司);TGL-16C型高速離心機(上海安亭科學儀器廠)。

　　1.1.2 試劑 對照品：香蒲新苷(批號：Y14S8H43976)，異鼠李素-3-O-新橙皮苷(批號：H30M3X1)，異鼠李素(批號：P23A9F68614)，琥珀酸(批號：B20937)，對羥基苯甲酸(批號：MKBK3576V)，山奈酚-3-O-葡萄糖苷(批號：Y19M8H36474)，異鼠李素-3-O-蕓香糖苷(批號：S08A8D33447)，槲皮素(批號：C09S8Y43412)，柚皮素(批號：X21M7C11378)，山柰酚(批號：C26J8Y38642)均購自源葉生物科技有限公司。甲醇(色譜純，批號：180975，江蘇漢邦科技有限公司);乙腈(色譜純，批號：SHBK5734，默克股份有限公司);磷酸(色譜純，批號：C1801089，阿拉丁)。

　　1.1.3 藥材 蒲黃樣品采集于江蘇省南京市棲霞區(qū)仙林湖(118°58′59.33″ E、32°07′28.38″ N)，原植物經(jīng)南京中醫(yī)藥大學中藥資源學教研室嚴輝副教授鑒定為香蒲科植物水燭香蒲(Typha angustifolia)。

　　1.2 方法

　　1.2.1 蒲黃樣品采集及前處理 自2019年3月31日起，每隔7天采集一次樣品，至有雄花序后，每2天采集1次花粉。采集的蒲黃莖葉，記錄生長情況。樣品性狀見圖1，樣品株高及基部直徑數(shù)據(jù)見表1。60 ℃恒溫干燥后打粉，過三號篩。蒲黃花粉置紗篩中，保持水平狀態(tài)過篩，除去雜質(zhì)。

　　花粉在用掃描電鏡拍照前，經(jīng)過如下處理：將花粉粒固定在甲醛溶液(5 mL 38%甲醛、5 mL冰醋酸、90 mL 50% 乙醇和5 mL甘油)中，在24 ℃下，分別用濃度為70%、80%、90%、95%和100%的乙醇溶液水合20 min。分別用乙醇和乙酸異戊酯混合溶液(比例為75%∶25%、50%∶50%、25%∶75%和100%乙酸異戊酯)處理20 min，4 h后冷凍干燥(Gao et al.， 2019)。

　　1.2.2 UPLC-Q-TOF-MS分析

　　1.2.2.1 液相色譜條件 Waters ACQUITYTM UPLC HSS T3色譜柱(100 mm × 2.1 mm， 1.8 μm)，流速 0.3 mL·min-1，柱溫 30 ℃，進樣量 4 μL，流動相為0.1%甲酸水溶液(A)(v/v)，乙腈(B)，梯度洗脫為0～10 min，15% B;10～15 min，15%～30% B;15～25 min，30%～50% B;25～28 min，50%～15% B;28～30 min，15%(Ding et al.， 2018)。

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