【摘要】 白血病是造血系統(tǒng)的惡性腫瘤，在形態(tài)上變化雖相當(dāng)大，但仍能表達(dá)正常血細(xì)胞所具有的抗原，因而可依據(jù)其抗原的表達(dá)譜對白血病進(jìn)行免疫分型. 我們對24例臨床確診為急慢性白血病，但形態(tài)學(xué)分型較困難的患者，應(yīng)用流式細(xì)胞儀對其進(jìn)行了免疫分型，并與FAB分型進(jìn)行了比較.

　　【關(guān)鍵詞】 白血病;免疫分型;流式細(xì)胞儀

　　目的： 應(yīng)用流式細(xì)胞儀對24例臨床形態(tài)學(xué)診斷困難的急慢性白血病進(jìn)行快速、有效地免疫分型，以指導(dǎo)臨床化療. 方法： 采用單克隆抗體雙色直接免疫熒光標(biāo)記法及多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)(FCM)，分型根據(jù)抗體積分系統(tǒng)，并與FAB分型進(jìn)行比較. 結(jié)果： ① 9例臨床診斷慢性淋巴細(xì)胞白血病經(jīng)FCM免疫分型確診為B淋巴細(xì)胞性白血病;

　　② 5例臨床診斷急性淋巴細(xì)胞白血病(L2)的患者經(jīng)FCM免疫分型確診1例為B淋巴細(xì)胞性白血病;2例為T淋巴細(xì)胞性白血病，且1例伴紅系異常改變; 1例為未分化型白血病;1例為淋巴細(xì)胞白血病B，T雙表達(dá);③ 5例急性非淋巴細(xì)胞性白血病經(jīng)FCM免疫分型確診2例為髓系白血病;3例為紅白血病(M6);④ 1例MDS伴骨髓纖維化經(jīng)FCM免疫分型確診為M6;⑤ 4例疑似粒淋雙表型白血病經(jīng)FCM免疫分型確診為粒淋雙表型白血病. 免疫分型與FAB分型的符合率為79.2%. 結(jié)論： 流式細(xì)胞儀多參數(shù)白血病免疫表型分析，可以彌補FAB分型的不足，為臨床診斷提供重要依據(jù)，并為白血病治療措施的個體化提供依據(jù).

　　0引言

　　1材料和方法

　　1.1材料白血病患者的骨髓24(男11，女13)例，年齡17～67(平均44)歲. 所用單抗包括FITC標(biāo)記的MsIgG1,CD10,CD20,CD3,CD7,HLADR,CD41及Glycophorin A;藻紅蛋白(PE)標(biāo)記的MsIgG1,CD19,CD22,CD5,CD33,CD13及CD34，均購自美國BD公司.

　　1.2方法骨髓經(jīng)肝素抗凝后，PBS稀釋5倍，使用Ficoll(1077 g/L)分離骨髓單個核細(xì)胞，PBS洗滌2次，以2×1010/L懸于PBS中，按文獻(xiàn)[1]方法進(jìn)行標(biāo)記. 以標(biāo)記FITC的抗鑰孔嘁血藍(lán)素mAbIgG2a和標(biāo)記PE的抗鑰孔嘁血藍(lán)素mAbIgG1處理細(xì)胞作為陰性對照. 應(yīng)用美國BD公司的FACSort流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測，每個樣本收集5000～10 000個細(xì)胞，Cellquest軟件分析其抗原表達(dá)情況.

　　2結(jié)果

　　2.1抗原表達(dá)B淋巴細(xì)胞性白血病抗原表達(dá)為：CD19,20,22,HLADR; T淋巴細(xì)胞性白血病伴紅系異常改變陽性抗原表達(dá)為：CD5,CD3, CD7,HLADR，Glycophorin A(63.1%);髓系白血病抗原表達(dá)為：CD13,CD33;紅白血病(M6)抗原表達(dá)為：Glycophorin A[(96.4±5.6)%],CD34和CD41均為陰性;淋巴細(xì)胞白血病B,T雙表達(dá)陽性抗原為：CD19,CD10,CD20,CD3(89.3%), CD13,HLADR; 粒淋(B)雙表型白血病抗原表達(dá)為:CD19,CD10,CD20,CD22,CD33,CD13,HLADR;粒淋(T)雙表型白血病抗原表達(dá)

　　為:CD5,CD3,CD33,CD7,CD13,HLADR(表1).

　　2.2形態(tài)學(xué)和免疫分型臨床診斷慢性淋巴細(xì)胞白血病9例經(jīng)FCM免疫分型確診為B淋巴細(xì)胞性白血病;臨床診斷急性淋巴細(xì)胞白血病(L2)的5例經(jīng)FCM免疫分型確診1例為B淋巴細(xì)胞性白血病;2例為T淋巴細(xì)胞性白血病，且1例伴紅系異常改變; 1例為未分化型白血病;1例為淋巴細(xì)胞白血病B,T雙表達(dá);急性非淋巴細(xì)胞性白血病5例經(jīng)FCM免疫分型確診2例為髓系白血病;3例為紅白血病(M6); MDS伴骨髓纖維化1例經(jīng)FCM免疫分型確診為M6;疑似粒淋雙表型白血病4例經(jīng)FCM免疫分型確診為粒淋雙表型白血病. 免疫分型與FAB分型的符合率為79.2%(表2).

　　表1流式細(xì)胞儀免疫分型(略)

　　ND+：抗原表達(dá)量>20%. -：抗原表達(dá)量<20%. ND:未測.

　　表2形態(tài)學(xué)分型和FCM免疫分型(略)

　　3討論

　　白血病的主要類型有源自未成熟T或B淋巴細(xì)胞的ALL，源自未成熟骨髓細(xì)胞的AML，源自成熟B淋巴細(xì)胞的CLL，源自粒細(xì)胞前身的CML. 準(zhǔn)確的診斷可以指導(dǎo)臨床選擇最有效的治療手段. 一般認(rèn)為形態(tài)學(xué)鑒定細(xì)胞性質(zhì)準(zhǔn)確率在60%，而免疫學(xué)分型可超過90%，尤其在下列情況下，應(yīng)用單克隆抗體對白血病進(jìn)行免疫分型更為必要. 用形態(tài)學(xué)、細(xì)胞化學(xué)染色不能肯定細(xì)胞來源的白血病[2-3]. 如：未分化型白血病和混合細(xì)胞性白血病;形態(tài)學(xué)為急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)或急性未分化白血病(AUL)但缺乏特異性淋巴細(xì)胞系列抗原標(biāo)記;部分髓系白血病;慢性淋巴細(xì)胞白血病;微小殘留白血病.

　　目前，臨床對急慢性白血病的診斷主要是根據(jù)對原始血細(xì)胞的形態(tài)學(xué)與細(xì)胞化學(xué)染色的分析來診斷. 隨著免疫學(xué)單抗技術(shù)的不斷提高和對白細(xì)胞抗原研究的日趨深入，學(xué)者們認(rèn)識到有些抗原特異性強，很少發(fā)生交叉表達(dá)，如CD3,CD22,CD79,MPO等，有些曾被認(rèn)為屬于某一系列特異性的抗原實際在其他系列的某一階段或特殊情況下也可能出現(xiàn)[2,4],我們對24例臨床形態(tài)學(xué)及細(xì)胞化學(xué)染色難以分型的急慢性白血病，采用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行了免疫分型. 其中，1例急性淋巴細(xì)胞白血病經(jīng)FCM分型確診為淋巴細(xì)胞白血病T,B雙表達(dá)， 1例臨床診斷急淋L2并疑似粒淋雙表型白血病的患者，經(jīng)FCM分型確診為T淋巴細(xì)胞性白血病伴紅系異常改變，即淋紅雙表;以上兩例經(jīng)FCM分型的白血病在國內(nèi)尚未見報道;經(jīng)FCM分型確診為M6的4例白血病，臨床無1例疑似M6診斷;而4例疑似粒淋雙表型白血病經(jīng)FCM分型均確診為粒淋雙表型白血病;免疫分型與FAB分型的符合率為79.2%. 與其他學(xué)者報告的83.9%相近[5]. 流式細(xì)胞儀多參數(shù)白血病免疫表型分析不僅可以有效地支持臨床診斷，還可以彌補FAB分型的不足，為臨床診斷提供重要依據(jù). 此外，免疫分型還可以提示預(yù)后，監(jiān)測病程的發(fā)展、療效，進(jìn)行微小殘留白血病的檢測，從而為臨床預(yù)測白血病復(fù)發(fā)，選擇個體化治療方案提供重要的依據(jù).