[摘要]本文對國家標準《食品中蘇丹紅染料的檢測方法 高效液相色譜法》(GB/T 19681—2005)中利用高效液相色譜法測定辣椒油中蘇丹紅含量的方法進行優化，使方法更加簡便快捷，且滿足實驗要求。以正己烷為提取溶劑，提取液經ProElut SDH固相萃取柱凈化，經高效液相色譜柱分離，外標法定量。優化后的方法中，蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ在0.16～2.56?g/mL的濃度范圍內線性關系良好，蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的檢出限分別為0.010 7?g/kg、0.011 1?g/kg、0.011 9?g/kg、0.011 0?g/kg，加標回收率為89.21%～95.69%。優化后的實驗方法易于操作，能夠縮短實驗時間，有良好的回收率，更適合檢測辣椒油中蘇丹紅的含量。

　　[關鍵詞]高效液相色譜法;辣椒油;蘇丹紅

　　蘇丹紅是親脂性偶氮化合物，它的化學成分中含有一種叫萘的化合物，此物質具有偶氮結構，這種化學結構決定了它的致突變性和致癌性，對人體的肝腎器官具有明顯的毒性作用，在人類肝細胞研究中顯現出可能致癌的特性。蘇丹紅屬于化工染色劑，主要用于石油、機油和其他一些工業溶劑中，目的是使其增色，在我國禁止應用于食品加工。食品中蘇丹紅含量的檢測方法主要有薄層色譜法、高效液相色譜法、近紅外光譜、凝膠滲透色譜、液相色譜-質譜聯用法，該方法有機試劑用量大、操作過程煩瑣、耗時長。本文對此方法進行了優化，使操作過程簡單直觀，減少了有機試劑用量，縮短了實驗時間，提高了實驗效率，更適合用于辣椒油中蘇丹紅含量的檢測[1-4]。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 儀器與設備

　　高效液相色譜儀(戴安Ultimate 3000)：賽默飛世爾科技有限公司;萬分之一電子天平(先行者CP224C)：奧豪斯儀器(上海)有限公司;十萬分之一天平(METTLER AE 240)：梅特勒-托利多有限公司;旋轉蒸發儀(Rotavapor R210)：BUCHI有限公司;數控超聲波清洗器(KQ5200DB)：昆明市超聲儀器有限公司[5]。

　　1.1.2 試劑與材料

　　蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ標準品：美國Stanford Chemicals;正己烷：色譜純;丙酮：色譜純;乙腈：色譜純;磷酸：分析純;超純水;ProElut SDH 6mL 30/pkg固相萃取柱：迪馬科技;濾膜：0.22?m;辣椒油樣品：市售。

　　1.2 標準溶液的配置

　　標準儲備液：分別稱取蘇丹紅I、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ標準品各10mg于250mL容量瓶中，正己烷溶解后并定容至刻度線。

　　標準溶液：分別取標準儲備液0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.8mL、1mL、1.6mL，用正己烷定容至25mL，該標準系列濃度為0.16?g/mL、0.32?g/mL、0.64?g/mL、1.28?g/mL、1.6?g/mL、2.56?g/mL，繪制標準曲線。

　　1.3 樣品的前處理

　　1.3.1 《食品中蘇丹紅染料的檢測方法 高效液相色譜法》的前處理方法

　　稱取1g樣品于小燒杯中，加入適量的正己烷溶解(約10mL)，慢慢加入氧化鋁層析柱中(柱中頁面約為2mm時上樣)，待樣液完全流出后，根據樣品中油類雜志的多少用10～30mL正己烷洗柱，直至流出液無色，棄去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液60mL洗脫，收集，濃縮，用丙酮定容至5mL，過0.22?m的濾膜，備用[6]。

　　1.3.2 優化后的前處理方法

　　精密稱取樣品約1g于50mL離心管中，加入10mL正己烷溶解，超聲30min，將上清液全部加入ProElut SDH固相萃取柱中(預先用5mL二氯甲烷，5mL正己烷活化平衡)，待上清液全部過濾完后，用5mL正己烷淋洗，再用5mL二氯甲烷洗脫，收集洗脫液于50mL雞心瓶中，40℃旋干，再用1mL正己烷定容，過0.22?m的濾膜，備用。

　　1.4 色譜條件

　　1.4.1 《食品中蘇丹紅染料的檢測方法 高效液相色譜法》的色譜條件

　　色譜柱：Poroshell 120 EC-C18 4.6×150mm，4.0?m;柱溫：30℃;流動相A：0.1%甲酸水的溶液∶乙腈=85∶15;流動相B：0.1%甲酸乙腈溶液∶丙酮=80∶20。流速1.0mL/min;進樣量10?L;檢測波長：蘇丹紅Ⅰ為478nm，蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ均為520nm。

　　1.4.2 優化方法一的色譜條件

　　色譜柱：Poroshell 120 EC-C18 4.6×150mm，4.0?m;柱溫：40℃;流動相乙腈：水(V∶V=90∶10)。流速1.0mL/min;進樣量10?L;檢測波長：500nm。

　　1.4.3 優化方法二的色譜條件

　　色譜柱：Poroshell 120 EC-C18 4.6×150mm，4.0?m;柱溫：40℃;流動相A：乙腈;流動相B：0.2%磷酸。流速1.0mL/min;進樣量10?L;檢測波長：500nm。

　　2 結果與分析

　　2.1 色譜圖比較

　　比較國標法、優化方法一和優化方法二所得到的色譜圖可看出，三種方法中不同的流動相均能使蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ和蘇丹紅Ⅳ有效分離。但國家標準中的流動相配置過程煩瑣，使用有機試劑量較大，且分析時間最長。優化方法一中所用的是乙腈和水進行等度洗脫，雖分析時間最短，但蘇丹紅Ⅱ和蘇丹紅Ⅲ的分離度較其余兩種方法較差，且蘇丹紅Ⅳ的峰型也不如其余兩種方法好。優化方法二的流動相是乙腈與0.2%磷酸進行梯度洗脫，各蘇丹紅的峰型良好，分離度佳，且分析時間也不長[7-8]。

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