摘要：為探索花鰍對溫度的急性應(yīng)激反應(yīng)，采用8℃、12℃、16℃和20℃脅迫長期養(yǎng)殖于12±2℃的溫度條件下的花鰍12小時(shí)、24小時(shí)和48小時(shí)，觀察行為、成活率，超氧化物歧化酶、過氧化氫酶和丙二醛指標(biāo)。結(jié)果顯示，4個(gè)溫度梯度下，成活率均為100%，行為發(fā)生變化，溫度越高活動性越強(qiáng)，20℃開始出現(xiàn)在水體中上層頻繁游動現(xiàn)象。同一溫度處理，除12℃處理組，超氧化物歧化酶、過氧化氫酶活性和丙二醛含量均隨時(shí)間延長呈先上升后下降的趨勢，不同時(shí)間存在顯著差異;同一檢測時(shí)間，三者均隨溫度升高呈先下降后上升的趨勢，除48小時(shí)的不同溫度超氧化物歧化酶活性之間無顯著差異，其余不同溫度均存在顯著差異。水溫發(fā)生急劇變化，影響魚體行為，產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)。在實(shí)際養(yǎng)殖生產(chǎn)中，應(yīng)密切關(guān)注養(yǎng)殖水溫的變化，減少溫度應(yīng)激，增加花鰍免疫力，提高抗病能力。

　　關(guān)鍵詞：花鰍;溫度;超氧化物歧化酶;過氧化氫酶;丙二醛

　　花鰍(Cobitis taenia)屬鰍科動物，是多年生小型經(jīng)濟(jì)冷水魚，也是一味中藥材，長白山區(qū)冷水域有分布，對水體環(huán)境要求極高，生活在清澈的砂石底溪水或河流中[1]，明顯不同于常見泥鰍。魚類在進(jìn)化過程中對外界剌激形成了應(yīng)激反應(yīng)。如果刺激超出了魚類正常的調(diào)控范圍，則會對健康產(chǎn)生危害。受養(yǎng)殖環(huán)境約束，當(dāng)魚無法逃避又不能克服這些有害刺激時(shí)，對魚的危害就更加突出。因?yàn)閼?yīng)激能力會使魚類重新分配體內(nèi)能量，以應(yīng)對眼前危機(jī)，進(jìn)而將不可避免地削弱生長、繁殖和免疫等方面的機(jī)能，即為應(yīng)激付出一定的生物學(xué)代價(jià)[2]。本文從溫度刺激方面入手，探究花鰍應(yīng)激反應(yīng)，并尋找緩解其應(yīng)激的措施，以期為花鰍及其他長白山區(qū)冷水魚的人工馴養(yǎng)和繁殖等活動提供理論依據(jù)和實(shí)踐基礎(chǔ)，同時(shí)豐富魚類應(yīng)激生物學(xué)。

　　1 材料與方法

　　1.1 試驗(yàn)材料與飼養(yǎng)管理

　　試驗(yàn)在通化師范學(xué)院長白山區(qū)冷水魚類分子進(jìn)化與健康養(yǎng)殖試驗(yàn)室進(jìn)行，材料于2020年06月初取自通化育華農(nóng)林科技發(fā)展有限責(zé)任公司。共計(jì)450條外觀無異常、健康、初始重量為8.71±0.50 g、體長為101.74±1.70 mm的花鰍作為研究對象，置于養(yǎng)殖水族箱(聚乙烯塑料，長寬高分別為1.5 m、1.0 m、0.8 m)，飼養(yǎng)條件為水溫12±1℃，pH值7.0～7.5，溶解氧含量大于5.0 mg/L，氨氮含量小于0.01 mg/L，硫化物小于0.05 mg/L，穩(wěn)定飼養(yǎng)2周后，開始試驗(yàn)。試驗(yàn)期間，每天準(zhǔn)確稱取一定量的飼料，依據(jù)每日殘餌量調(diào)整次日投喂量，投喂后1小時(shí)，將殘餌用虹吸管吸出。投喂時(shí)間分別為每天早、晚6：00。養(yǎng)殖用水先經(jīng)曝氣，每周換水1次。

　　1.2 試驗(yàn)方法與操作步驟

　　試驗(yàn)設(shè)置4個(gè)溫度處理組(8℃、12℃、16℃和20℃)，每個(gè)溫度設(shè)置3個(gè)重復(fù)組，采用自動控溫設(shè)備控制溫度。試驗(yàn)開始隨機(jī)取30尾放入設(shè)定溫度的水族箱中，在0小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)和48小時(shí)取樣，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)每箱隨機(jī)取樣5尾魚，試驗(yàn)期間不飼喂。

　　1.3 樣品采集及測定

　　取5尾魚后解剖取肝胰臟，用吸水紙將肝胰臟擦干，精準(zhǔn)稱取組織，冰浴條件下，按體積(mL)∶質(zhì)量(g)=9∶1的比例加入生理鹽水，使用玻璃研磨器磨碎后裝進(jìn)離心管，2500 r/min，4℃條件下，離心10 min取上清液檢測。超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、丙二醛(MDA)試劑盒，購自南京建成生物研究所，操作按照說明書執(zhí)行。

　　1.4 數(shù)據(jù)處理

　　試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)均用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA)，采用Duncan法進(jìn)行多重比較。數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行表示。

　　2 結(jié)果與分析

　　2.1 急性溫度脅迫對花鰍生存和行為影響

　　如表1所示，所選擇的4個(gè)溫度3個(gè)時(shí)間點(diǎn)，花鰍成活率均為100%，無死亡，行為發(fā)生了變化，雖都會在底層聚集，但溫度越低活動性減弱，溫度越高活動性加強(qiáng)，20℃開始出現(xiàn)在中上層頻繁游動現(xiàn)象。

　　2.2 急性溫度脅迫對花鰍肝胰臟SOD和CAT活性的影響

　　如圖1所示，同一溫度處理，SOD活性隨時(shí)間延長呈先上升后下降的趨勢，除12℃，不同時(shí)間SOD活性之間存在顯著差異(P<0.05);同一檢測時(shí)間，除起始0小時(shí)，SOD活性隨溫度升高呈先下降后上升的趨勢，12小時(shí)和24小時(shí)的不同溫度SOD活性之間存在顯著差異(P<0.05)，48小時(shí)的不同溫度SOD活性之間無顯著差異。

　　如圖2所示，同一溫度處理，CAT活性隨時(shí)間延長呈先上升后下降的趨勢，除12℃，不同時(shí)間CAT活性之間存在顯著差異(P<0.05);同一檢測時(shí)間，除起始0小時(shí)，CAT活性隨溫度升高呈先下降后上升的趨勢，不同溫度CAT活性之間存在顯著差異(P<0.05)。

　　2.3 急性溫度脅迫對花鰍肝胰臟MDA含量的影響

　　如圖3所示，同一溫度處理，除12℃，MDA含量均隨時(shí)間延長呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，不同時(shí)間MDA含量之間存在顯著差異(P<0.05);同一檢測時(shí)間，除起始0小時(shí)，MDA含量均隨溫度升高呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢，不同溫度MDA含量之間存在顯著差異(P<0.05)。

　　3 討論

　　溫度是影響動物生長發(fā)育最重要的因素之一。急性溫度變化是魚類在養(yǎng)殖生產(chǎn)、商品運(yùn)輸甚至自然生活過程中可能遭遇到的最常見脅迫，可造成機(jī)體代謝紊亂，使體內(nèi)自由基大量積累，進(jìn)而損害細(xì)胞和組織正常的生理機(jī)能和免疫防御能力[3]。魚類會通過調(diào)節(jié)代謝、離子平衡以應(yīng)對溫度變化，保持相對穩(wěn)定的平衡狀態(tài)，減少自身受到傷害。魚類具有認(rèn)知或感知能力[4]，行為變化是遭受刺激后最直接、快速的反應(yīng)[5]。與生理指標(biāo)的檢測方法相比，具有簡易、便捷、實(shí)用等優(yōu)勢。由試驗(yàn)可知，在急性溫度脅迫下，成活率雖均為100%(表1)，但20℃開始出現(xiàn)中上層頻繁游動現(xiàn)象。由此可見，相對高溫急性脅迫，花鰍對于低溫脅迫適應(yīng)能力要更強(qiáng)一些，這也進(jìn)一步證實(shí)了花鰍屬于典型的冷水魚。