摘 要 卵巢癌的死亡率高，是嚴重威脅女性健康的重大疾病。當前，由于缺乏有效、便捷的早期診斷技術，大部分卵巢癌患者被發現時已經處于中晚期而錯失最佳治療時機。因此，對早期卵巢癌的快速、靈敏、低成本和準確檢測具有非常重要的意義。在早期卵巢癌患者血液中存在溶血磷脂酸(Lysobisphosphatidic acids， LPA)濃度升高現象，而在其它疾病中卻較少出現此情況，因此LPA可作為一種高特異性、有良好臨床應用前景的卵巢癌標志物。近年來， 該領域的相關研究取得了較大的進展， 開發了很多LPA的檢測技術和方法。本文對LPA的檢測方法進行分類、歸納和總結，著重介紹了近年來該領域的重要進展，最后對LPA標記物檢測在臨床應用方面所面臨的挑戰進行了分析， 對其發展和前景進行了展望。

　　關鍵詞 卵巢癌; 溶血磷脂酸; 癌癥標志物; 質譜檢測; 比色檢測; 熒光檢測; 評述

　　1 引 言

　　卵巢癌是嚴重威脅女性健康的疾病[1，2]。由于卵巢癌早期缺少癥狀，篩查方法有限，因此其早期診斷比較困難。75%的卵巢癌患者就診時已為晚期，而晚期病例療效不佳(晚期卵巢癌患者5年生存率僅25%)[3～6]。因此，雖然卵巢癌的發病率居婦科惡性腫瘤的第三位，但其死亡率高居婦科癌癥首位。值得注意的是，早期確診的卵巢癌患者5年生存率為90%。因此，實現卵巢癌早期診斷，可以大幅度降低卵巢癌的死亡率。目前，臨床上卵巢癌診斷的方法主要包括影像學檢查(超聲成像、計算機斷層掃描、正電子發射斷層掃描及核磁共振成像等)、組織病理切片等。影像學檢查手段能夠明確盆腔腫塊是否存在，甚至能發現卵巢腫瘤，區分固體腫塊和液體囊腫，判斷腫塊的尺寸，以及觀察腫塊內部的情況等。盡管如此，影像學檢查無法判定卵巢腫塊是良性或惡性，且其成本高、價格昂貴、普適性低。組織病理切片檢查需要通過手術切除選取標本，制成病理切片，用顯微鏡檢查病變。病理切片是卵巢癌確診的主要手段，但其缺點是需要手術、創傷性大，且無法發現轉移病灶。這些影像學檢查、組織病理切片方法通常僅適用于中晚期卵巢癌病人的檢查。

　　通過體液檢測卵巢癌相關標志物是更為便捷、經濟的方法[1，7，8]。卵巢癌標志物主要有人附睪蛋白4、癌抗原-125(Cancer antigen 125， CA-125)和間皮素等，其中CA-125在臨床上已被用于卵巢癌的篩查[9～11]。CA-125是一種糖類蛋白質，中晚期卵巢癌患者的CA-125水平會升高，但是檢測CA-125對早期卵巢癌的篩檢并不適用，有些其它疾病或健康女性在特定生理周期也會引起血清中的CA-125水平升高。此外，在卵巢癌早期僅有25%左右的患者CA-125的水平升高[12]。因此，通過CA-125篩查早期卵巢癌具有高的假陽性和漏診率。溶血磷脂酸(Lysobisphosphatidic acids， LPA)在卵巢癌細胞的增殖、侵襲等方面發揮了重要作用。在卵巢癌早期，新血管增生對腫瘤的增殖至關重要。Song等[14]研究發現，LPA能誘導卵巢癌細胞高度表達血管內皮生長因子(Vascular endothelial growth factor， VEGF)，而VEGF能在腫瘤部位誘導血管新生。LPA能促使卵巢癌細胞增值轉錄因子(主要為叉頭框蛋白M1， forkhead box M1)表達，而直接誘導卵巢癌增殖[15]。另外，LPA能促進基質金屬蛋白酶9(Matrix metalloproteinase 9， MMP9)的表達，MMP9能促進卵巢癌轉移和侵襲[16]。這說明LPA在卵巢癌的發生、發展中發揮了重要作用[16～18]。據報道，卵巢癌早期患者血清中的LPA升高率達90%，而中晚期患者可達100%[19]。LPA是一種脂類物質，易從血液、腹水、唾液等中提取，因而便于進行分析和檢測。上述結果表明， LPA是具有臨床應用前景的卵巢癌早期標記物。

　　基于LPA檢測的重要意義，大量檢測手段、生物探針被開發用于檢測LPA[12，20～33]。本研究組也構建了聚丁二炔比色探針檢測血清中的LPA[21]。當前， LPA的檢測主要通過液相色譜-質譜聯用、氣相色譜與原子吸收光譜或質譜聯用等方法實現[13，23，34～50]。這些方法具有靈敏度高、普適性好的優勢，但缺點是耗時、操作復雜和成本高。LPA也可以通過熒光法、比色法和電化學發光等便捷、經濟的方法進行檢測，然而它們的特異性和靈敏度需要進一步提高。近年來，由于納米技術、光譜技術的發展和應用，LPA檢測方法在靈敏度、特異性等方面取得了很大的進展。本文對LPA檢測主要方法進行分類闡述， 對相關檢測機理和影響因素進行了深入的探討，重點介紹了該領域最新進展，最后展望了LPA檢測在臨床應用中面臨的挑戰和機遇。

　　2 質譜法檢測LPA

　　質譜技術具有靈敏度高、準確性高、響應時間快、需要的樣本量少、通量高等優點，被廣泛用于生物樣品的分析和檢測[51]，已經成為生物樣品中脂質分析的常規技術。

　　質譜檢測LPA的準確性主要依靠分離技術。采用質譜檢測體液(主要包括血液、尿液、唾液等)樣本中的LPA通常按照如圖1所示的流程[13]，分8個步驟進行。首先是樣本收集，然后經過脂質抽提和色譜分離后，再進入質譜儀進行檢測和分析[52]。體液樣本中最普遍采用的是血液樣本。血液中LPA的豐度比溶血磷脂酰膽堿低兩個數量級，同時還包含與LPA具有類似結構的溶血磷脂酰絲氨酸、磷脂酰膽堿等，這些脂質分子都會對質譜檢測LPA造成干擾。近年來，在LPA的抽提和分離方面的研究也取得了很大的進展。對于抽提方法，已從傳統的甲醇/氯仿脂質液-液提取法(Bligh & dyer方法)發展到固-液提取法。對于分離方法，也從早期的毛細管電泳法、薄層色譜法等發展到高效液相色譜法等。目前，高效液相色譜法已經成為分離LPA的常規方法。質譜技術中，常規的電子碰撞電離、電噴霧電離和基質輔助激光解吸電離技術都已被用于LPA的檢測。 本文將從抽提、分離方法和電離方式三個方面對質譜法檢測LPA的最新進展進行歸納和總結。

　　作者：李年生; 陳立; 肖祚庥; 楊禹祺; 艾可龍

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