【摘要】目的探討藏黨參中是否含有總黃酮成分并利用紫外分光光度法測定總黃酮的含量。方法用80%的乙醇提取總黃酮，以蘆丁為對照品，在紫外365nm處測定。結(jié)果平均加樣回收率為95.13%，RSD為2.8%，總黃酮的含量為0.0875%。結(jié)論該方法準(zhǔn)確可靠，可以作為藏黨參總黃酮的含量測定的檢測方法。

　　【關(guān)鍵詞】 藏黨參; 總黃酮

　　Determination of the Content of Total Flavonoid in Codonpsis thalictrifolia WallZHENG Juan, WANG Lifan, HU Huagang, XU SifanCentral University for Nationalities, Institute of Chinese Minority Traditional Medicine, Beijing, 100081, ChinaAbstract：ObjectiveTo determine the content of total flavonoids in Codonpsis thalictrifolia Wall. by UV-spectrometry.MethodsTotal flavonoids was extracted with 80% ethanol and rutin was used as reference substance. The content was detected at 365nm.ResultsThe average recovery rate was 95.13%, RSD was 2.8% and the content of total flavonoids was 0.0875%。ConclusionThis method is simple and reliable and can be used for determination of the content of total flavonoids.

　　Key words：Codonpsis thalictrifolia Wall.; Total flavonoids

　　藏黨參 ，藏藥名為魯堆多吉(herba codonopsis mollis)，是公元18世紀(jì)《晶珠本草》中記載的2 294種藥物之一，全草入藥[1]。本品為桔梗科植物長花黨參Codonopsis mollis Chipp.的全草, 據(jù)《晶珠本草》記載，分為脈花黨參黑色類和長花黨參白色類兩種，視為正品[1]。本研究所用的藥材為長花黨參Codonpsis thalictrifolia Wall.，生長于青藏高原與西秦嶺相匯處，海拔2 000～3 000 m之間，常被藏族人民用于消炎散腫，滋補壯陽，健脾胃，補氣，可治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、神經(jīng)痛、神經(jīng)麻痹、瘡疥癰腫、麻風(fēng)、腳氣病、癔病等[2，3]。

　　通過研究表明魯堆多吉提取物含有多種有效成分，如多糖，皂苷等(三萜和甾體類)，其中以三萜成分較多[1]。本實驗室已測定過多糖和皂苷的含量，分別是24.32%和3.02%[4]。但是尚未檢測過藏黨參中總黃酮的含量。本次實驗就是以藏黨參為研究對象，用紫外分光光度計首次對其總黃酮的含量進行測定。

　　1 器材

　　1.1 儀器UNICO2000分光光度計(上海尤尼柯公司); Heidolph旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國海道夫公司);分析天平(瑞士METTLER TOLEDO公司);打粉機(天津泰斯特儀器有限公司);回流提取器(天津市泰斯特儀器有限公司)。

　　1.2 材料蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所)，鎂粉，鹽酸，硝酸鋁，亞硝酸鈉，氫氧化鈉及其他試劑均為分析純(北京化學(xué)試劑公司)。

　　1.3 藥材藏黨參，產(chǎn)地為甘肅省岷縣(購于蘭州金開來商貿(mào)有限公司);潞黨參產(chǎn)地為山西省陵川縣(購于北京藥材公司)。在陰涼處風(fēng)干，粉碎后，過24目篩，置干燥處備用。

　　2 方法與結(jié)果

　　2.1 樣品的制備精密稱取藏黨參6 g，打成粉，置圓底燒瓶，用80%乙醇回流提取兩次(每次30 min，每次100 ml左右)，定容到200 ml體積。

　　2.2 總黃酮成分的測定顯色反應(yīng)：取1 ml的溶液，加少許的鎂粉和鹽酸，呈褐黃色，再取1 ml的溶液，加少量的10%NAOH, 呈橙色，加熱之后呈黃色。

　　TLC：以蘆丁為對照品，各取供試液及對照液適量點與同一硅膠GF254板上，以醋酸乙酯∶甲醇∶水=15∶2∶1 展開，3%AlCl3作為顯色劑。置紫外燈365 nm下觀察熒光，供試液色譜在與對照液色譜相應(yīng)位置上顯示相同的斑點。由顯色反應(yīng)及TLC試驗表明說明該藥材含有黃酮類成分。

　　2.3 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備精密稱取120 ℃減壓干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品11 mg，置于100 ml容量瓶中，加適量的80%的乙醇溶液溶解并定容至刻度，搖勻，得0.11 mg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

　　2.4 最大吸收波長的選擇分別量取2.0 ml蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲備液和樣品液置于10 ml容量瓶中，加入3 ml 80%乙醇補齊, 加入5%亞硝酸鈉0.4 ml，搖勻，放置6 min，加入10%硝酸鋁溶液0.4 ml，搖勻，放置6 min，再加入4%氫氧化鈉溶液4 ml，用蒸餾水補齊至10 ml，搖勻，放置15 min后，以相應(yīng)的試劑做空白對照，用紫外分光光度計進行全波長掃描，比較標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的掃描曲線，確定以510 nm為最大吸收波長來進行藏黨參總黃酮含量的測定。

　　2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品儲備液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0 ml，置于10 ml容量瓶中，按照如上的方法進行顯色，以空白試劑作對照，在510 nm處測定吸光度。見表1。表1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品濃度與吸光度關(guān)系(略)

　　2.6 精密度實驗取同一供試品溶液按“2.4”項的方法在波長510 nm處，以試劑空白為參比，重復(fù)測定4次，計算得RSD=3.36% (n=4)，結(jié)果表明儀器的精密度良好。

　　2.7 穩(wěn)定性實驗對同一供試品溶液，每間隔15 min測定吸光度，考察其在1 h之內(nèi)的穩(wěn)定性，計算得RSD=3.14 %。結(jié)果表明樣品的穩(wěn)定性良好。

　　2.8 重復(fù)性實驗取藏黨參藥材粗粉，按上述方法平行制備3份樣液，進行含量測定，計算得RSD= 0.57%(n=3)。結(jié)果表明，本實驗方法的重復(fù)性較好。

　　2.9 加樣回收率實驗分別量取藏黨參的樣品液1 ml，共4份，置于10 ml的容量瓶里。精密的加入0.11 mg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品儲備液0，0.6，0.8，1 ml，再加入80%的乙醇溶液補足至5 ml，照上述方法， 進行含量測定，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。結(jié)果見表2。表2 加樣回收率實驗(略)

　　回收率(%)=(測得量-原有量)/加入量×100%

　　2.10 藏黨參中總黃酮含量的測定精密吸取藏黨參樣品液1ml 4份，按照“2.4”項的方法進行含量測定，利用回歸方程曲線得藏黨參的含量為0.087 5%。

　　3 結(jié)論

　　本實驗采用紫外分光光度法，用80%的乙醇提取藏黨參的總黃酮，加樣回收率為95.13%，經(jīng)測定，總黃酮的含量為0.087 5%。此方法準(zhǔn)確可靠，結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好，可作為該藥材的測定方法。本研究為進一步研究藥理作用提供了實驗數(shù)據(jù)。

　　【參考文獻(xiàn)】

　　1]羅達(dá)尚. 新修晶珠本草[M]. 成都：四川科學(xué)技術(shù)出版社，2004:596.

　　[2]楊永昌. 藏藥志[M]. 西寧：青海人民出版社，1991：13.

　　[3]宋立人. 中華本草(藏藥卷)[M]. 上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999：361.

　　[4]王麗蕃，鄭娟，徐斯凡. 藏黨參和潞黨參中活性成分含量的對比研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2008，12(19)：2928.

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